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嘉峪檢測網(wǎng) 2019-07-24 17:25
2020版《中國藥典》9101分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則中對準(zhǔn)確度、精密度的相關(guān)要求仍未改變。方法驗(yàn)證中準(zhǔn)確度和精密度存在怎樣的關(guān)系，我們該如何理解其相關(guān)規(guī)定，本文表述下個人觀點(diǎn)，不足和錯誤之處，大家批評指正。
一、名詞解釋
準(zhǔn)確度：指采用該方法測定結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率表示。
精密度：指在規(guī)定的條件下，同一份均質(zhì)供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度，精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示
偶然誤差：是由于在測定過程中一系列有關(guān)因素微小的隨機(jī)波動而形成的具有相互抵償性的誤差。
系統(tǒng)誤差：是有某種特定的原因造成的誤差，一般具有固定的方向和大小，重復(fù)測定時重復(fù)出現(xiàn)。
相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）：標(biāo)準(zhǔn)偏差與計(jì)算結(jié)果算術(shù)平均值的比值。
范圍：系指分析方法能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時的高低限濃度或量的區(qū)間。
極差：是用來表示統(tǒng)計(jì)資料中的變異量數(shù)(measures of variation)，其最大值與最小值之間的差距，即最大值減最小值后所得的數(shù)據(jù)。
二、9101分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則關(guān)于準(zhǔn)確度、精密度的理解
9101分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則中關(guān)于準(zhǔn)確度、精密度相關(guān)數(shù)據(jù)要求列表如下：
源自AOAC 《Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals》的相關(guān)要求。
上述源自《膳食補(bǔ)充劑和植物制劑的相關(guān)物質(zhì)測定》的相關(guān)要求，化學(xué)藥物研究是否適用，個人的理解如下，供參考。
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項(xiàng)目 |
是否適用 |
理由 |
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原料含量 |
是 |
/ |
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制劑含量 |
部分適合 |
制劑存在不同的規(guī)格，但質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均規(guī)定了可接受范圍，而9101相關(guān)列表中規(guī)定了“待測成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)”并未明確是否考慮輔料，個人認(rèn)為均應(yīng)按不考慮輔料計(jì)，含量回收率均應(yīng)滿足為98%-101%。 |
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原料有關(guān)物質(zhì) |
否 |
有關(guān)物質(zhì)、殘留溶劑等涉及藥物安全性評估的檢測，不同于食品相關(guān)成分的檢測，差異在于藥物安全性相關(guān)指標(biāo)（有關(guān)、殘留等）時，主成分以全部溶解的形態(tài)存在于溶液中，而食品相關(guān)成分檢測時通常會采用萃取、過濾等樣品前處理過程，即食品檢測，檢測方法的基質(zhì)效應(yīng)較小而藥物相關(guān)雜質(zhì)的檢測基質(zhì)效應(yīng)較大（主成分對雜質(zhì)測定準(zhǔn)確度的影響），故無法滿足列表相關(guān)要求。 |
|
原料殘留溶劑 |
否 |
|
|
制劑有關(guān)物質(zhì) |
否 |
|
|
制劑殘留溶劑 |
否 |
|
|
元素雜質(zhì)檢測 |
否 |
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|
備注：9101中也注明了“在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于 0.01%及多成分等分析中，精密度限度可適當(dāng)放寬”。我們應(yīng)基于藥典9101相關(guān)理念，制定適合藥物質(zhì)量研究相關(guān)方法驗(yàn)證的SOP，不可教條的理解相關(guān)內(nèi)容。 |
||
分析方法的準(zhǔn)確性和精密度分別代表方法的兩個重要屬性，兩者之間的關(guān)系為方法的精密度好，準(zhǔn)確性不一定好；方法的精密度不好，準(zhǔn)確性肯定不好。準(zhǔn)確度的偏離是方法的偶然誤差，系統(tǒng)誤差共同作用的結(jié)果，精密度的偏離，是方法的偶然誤差作用的結(jié)果。
三、分析方法準(zhǔn)確度與精密度的關(guān)系
基于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)要求，分析方法準(zhǔn)確度的范圍應(yīng)小于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求的范圍，如某制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中要求其含量應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%-105.0%，通常分析方法的準(zhǔn)確度應(yīng)控制在98.0%-102.0%之間；分析方法的精密度的（以RSD%計(jì)）要求，通常不得大于準(zhǔn)確度的范圍要求，如某方法的準(zhǔn)確度要求在98.0%-102.0%之間，其方法的回收率的RSD最好控制在1.0%以內(nèi)。
實(shí)例
|
序號 |
吸光度(X) |
X2 |
|
1 |
0.4444 |
0.1975 |
|
2 |
0.4421 |
0.1955 |
|
3 |
0.4498 |
0.2023 |
|
4 |
0.4452 |
0.1982 |
|
5 |
0.4431 |
0.1963 |
|
6 |
0.4412 |
0.1947 |
|
總和 |
2.6658 |
1.1845 |
|
極差 |
0.0086 |
回收率的范圍要求為98.0%-102.0%，即100% ± 2%（0.4443 ± 0.0089），極值為0.0086（<0.0089）在±0.0089%的范圍，因此分析方法的精度控制在準(zhǔn)確度要求的一半較為合理。
理論1：色譜系統(tǒng)偏差的引入
USP621中關(guān)于系統(tǒng)適用性精度的要求，RSD%=KB√n/t90%，n-1，RSD為相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，K為常數(shù)0.349，B為各論中給出的上限減去100%（引申為含量的范圍要求），n為參考溶液重復(fù)進(jìn)樣的次數(shù)（3 ≤n ≤6），t90%是在n-1自由度90%的概率下的一組t值（雙側(cè)）
相對標(biāo)準(zhǔn)偏差要求
|
|
進(jìn)樣次數(shù) |
||||
|
B(%) |
3 |
4 |
5 |
6 |
9 |
|
2.0 |
0.41 |
0.59 |
0.73 |
0.85 |
1.13 |
|
2.5 |
0.52 |
0.74 |
0.92 |
1.06 |
1.41 |
|
3.0 |
0.62 |
0.89 |
1.10 |
1.27 |
1.69 |
|
... |
|
|
|
|
|
|
20.0 |
4.1 |
5.9 |
7.3 |
8.49 |
11.26 |
詳細(xì)計(jì)算過程如下(以B為2.0，進(jìn)樣次數(shù)為6為例)
備注：雙側(cè)90%（0.1）即單側(cè)95%（0.05）
|
K |
B |
√B |
N |
t90%,n-1 |
RSD |
|
0.349 |
2 |
1.414 |
6 |
2.015 |
0.85 |
由上述公式可知，液相色譜系統(tǒng)適用性的精度要求與含量范圍（引申為準(zhǔn)確度范圍）的關(guān)系與進(jìn)樣次數(shù)有關(guān)，以方法驗(yàn)證回收率(n=9)為例，若回收率范圍要求為100%±20%，則回收率的精密度RSD%應(yīng)控制在11.26%以內(nèi)，考慮到該公式的適用范圍，如配樣引入的誤差等，該要求可能需要適當(dāng)放寬，但不能超過準(zhǔn)確度的范圍要求。
理論2：基于濃度的實(shí)驗(yàn)規(guī)律
美國藥典論壇PF39（6）<1200>Requirements For Compendial Validation中規(guī)定回收率=100%±2C-0.15，方法的重復(fù)性（interlaboratory precision），RSD=C-0.15 ，重現(xiàn)性：RSDR=2C-0.15，
該公式為Fitness function函數(shù)，描述的食品相關(guān)檢測中分析物濃度C與分析精密度（RSD)之間關(guān)系，其出處為
基于上述規(guī)律，藥物研究方法驗(yàn)證中，若準(zhǔn)確度要求回收率80%-120%（數(shù)據(jù)在100% ±20%范圍內(nèi)），方法的精密度應(yīng)控制在10%以內(nèi)。
基于上述理論1和理論2，測定方法準(zhǔn)確度與精密度的關(guān)系為方法的精密度應(yīng)控制在準(zhǔn)確度范圍要求的一半較為合理，在不同實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行方法的重現(xiàn)時，其方法的精度要求可適當(dāng)放寬1.5-2倍，但不得超過2倍。
參考文獻(xiàn)
[1] USP<1225>
[2] USP<621>
[3] ICHQ2（R1）
[4] The horwitz ratio: a useful index of method performane with respect to precision
來源：藥事縱橫
